Je ne parlerais que des Eubactéries, et je ferais quelque chose de simple car dans ce groupe la notion d'espèce est très difficile a définir. En
effet, le critère morphologique est primordiale dans la classification, or les bactéries sont assez polymorphe au sein d'une espèce puisque que suivant l'environnement elles
n'ont pas la même morphologie. Une espèce bactérienne donnée pourra dans un environnement etre muni de flagelles (élément locomoteur), dans un autre ne pas en avoir, cette même
espèce pourra aussi avoir une capsule ou pas dans un autre environnement... Les bactéries en batonnet seront sous cette forme dans un milieu riche, mais elles pourront être d'une forme différente
dans un milieux plus pauvre.
Une généralité dont il faut se souvenir, les bactéries en forme de coques ne sporulent pas !! Je vais vous présenter une classification basé sur plusieurs tests : Catalase, Oxydase et bien sûr le test de Gram (explication des tests en bas de page !!)
Oxydase + : groupe des bactéries à Gram négatif saprophytes : Pseudomonas, Vibrio, Brucella ...
Oxydase - : Entérobactéries, Bactérie acétiques ...
TEST DE GRAM : Le test de Gram est un test incontournable, car il permet de diviser les bactéries en 2 groupes (très différent d'un point de vue du fonctionnement), les Gram- et les Gram+
Pour réaliser le test :
Faire un frotti bactérien sur une lame de verre et laisser secher
Fixer le frotti a la chaleur d'une flamme (en passant rapidement la lame dans la flamme du bec bunsen)
Coloration de Gram:
- plonger la lame dans le Violet cristal. (1 min)
- Rinçage à l'eau (petit filet d'eau coulant sur la face opposée au frotti).
- Plonger la lame dans le Lugol (Iode et Potassium), ce qui a pour effet de créer une lacque avec le violet cristal dans le cytoplasme bactérien.(1 min)
- Rinçage (de la même façon que le précedent)
- Plonger la lame dans l'alcool à 95° et faire des mouvements de va et vient, l'alcool élimine le colorant inutile et décolore les Gram- (30 sec voir moins).
- Plonger la lame dans la safranine (= contre coloration) les Gram- seront colorées en rose et les Gram+ resteront violet. Faire attention à ne colorer que la moitier de la lame (cela permet d'etre sur du résultat, les Gram- devront etre incolores sur la partie non plongée et les Gram+ seront violettes). (10sec)
- Rincer (de la même façon que les autres fois) et laisser secher.
Donc rose = Gram- et violet = Gram+ (cf enveloppe bactérienne des Gram+ évite la perte de la lacque formée par le Lugol et le violet cristal lors de la décoloration à l'alcool, ceci n'est pas le cas avec les enveloppes des Gram-)
Attention, le test de Gram est un test à prendre en compte, mais il arrive que le test ne marche pas, qu'il y ait des bactéries colorées en rose et en violet (des parties de la bactéries roses et d'autres violettes)
TEST CATALASE Oriente vers une identité les bactéries à Gram +.
Test simple à réaliser, dans le couvercle d'une boite de pétrie, on dépose 1 goutte d'eau (pas obligatoire) + de la biomasse et on met de l'eau oxygénée.
bulles = catalase +
pas de bulles = catalase -
TEST OXYDASE Normalement ce test est à pratiquer sur toute les souches bactériennes, mais dans la pratique on le fait sur les Gram -
C'est un test aussi simple à réaliser que le précédent, sur un papier filtre posé sur une lame de verre
on place un prélévement de biomasse (un "bout" de colonie bactérienne) et on met une goutte de réactif pour le test oxydase (je ne sais plus le nom)
et le test est fini :
violet = oxydase +
incolore = oxydase -
